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培育超級(jí)作物實(shí)踐活動(dòng)的設(shè)計(jì)與實(shí)施

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培育超級(jí)作物實(shí)踐活動(dòng)的設(shè)計(jì)與實(shí)施

教育部發(fā)布的《關(guān)于加強(qiáng)和改進(jìn)中小學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)的意見》提出:要強(qiáng)化學(xué)生實(shí)踐操作、親身感悟,組織開展好基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn)和拓展性實(shí)驗(yàn)[1]?!镀胀ǜ咧猩飳W(xué)課程標(biāo)準(zhǔn)(2017年版2020年修訂)》理念之一是“教學(xué)過(guò)程重實(shí)踐”,強(qiáng)調(diào)要關(guān)注學(xué)生學(xué)習(xí)過(guò)程中的實(shí)踐經(jīng)歷,從而加深學(xué)生對(duì)生物學(xué)概念的理解[2]。依據(jù)上述指導(dǎo)思想,若以培育超級(jí)作物“Pomato”作為教學(xué)主線,最佳的設(shè)計(jì)方案無(wú)疑是重現(xiàn)梅爾徹斯培育“Pomato”的部分實(shí)驗(yàn)過(guò)程,帶領(lǐng)學(xué)生開展原生質(zhì)體的分離、純化、融合的實(shí)踐活動(dòng),有利于更好地達(dá)成學(xué)習(xí)目標(biāo)。

1梅爾徹斯文獻(xiàn)資料的利用

梅爾徹斯文獻(xiàn)資料[3]中有些內(nèi)容可以轉(zhuǎn)化為教學(xué)資源,如培育“Pomato”的實(shí)驗(yàn)流程、細(xì)胞融合的圖片資料、雜種植株的表型特征圖片資料、雜種植株的形態(tài)學(xué)、細(xì)胞學(xué)、生物化學(xué)鑒定資料等均可用于課堂教學(xué),真實(shí)的實(shí)驗(yàn)可作為教學(xué)資源為學(xué)生搭建學(xué)習(xí)支架。

1.1實(shí)驗(yàn)過(guò)程將番茄葉肉細(xì)胞(淡綠色,2n=24)和馬鈴薯愈傷組織(無(wú)色,2n=24)分別置于較高滲透壓(如0.5mol/L甘露醇)溶液中,用纖維素酶和崩潰酶/果膠酶處理4—5h,去除細(xì)胞壁獲得原生質(zhì)體。兩者原生質(zhì)體在聚乙二醇溶液中10min,可以發(fā)現(xiàn)許多融合產(chǎn)物產(chǎn)生。將融合形成的雜種細(xì)胞轉(zhuǎn)移到富含營(yíng)養(yǎng)的培養(yǎng)基上,培養(yǎng)出愈傷組織,將愈傷組織再生出的小植株移植到土壤中。上述實(shí)驗(yàn)過(guò)程,是教師將文獻(xiàn)資料中的核心內(nèi)容進(jìn)行了簡(jiǎn)化后梳理而成,該過(guò)程與教材中關(guān)于植物體細(xì)胞雜交技術(shù)流程一致,可作為教學(xué)資源用于課堂教學(xué)。

1.2圖片資源培育“Pomato”的實(shí)驗(yàn)選用一直保持浸泡培養(yǎng)的馬鈴薯愈傷組織,制備無(wú)色的原生質(zhì)體,用溫室栽培的番茄(突變株)葉肉細(xì)胞,制備淡綠色原生質(zhì)體。選用兩種不同顏色的原生質(zhì)體進(jìn)行融合,利用兩種原生質(zhì)體顏色不同篩選融合原生質(zhì)體,圖1顯示融合原生質(zhì)體的細(xì)胞質(zhì)尚未混合。該篩選融合原生質(zhì)體的方法與學(xué)生實(shí)踐中的方法一致。借助實(shí)驗(yàn)過(guò)程的照片資料,利于學(xué)生理解篩選融合原生質(zhì)體的方法。梅爾徹斯培育成功的雜種植株如圖2所示。通過(guò)觀察不難發(fā)現(xiàn),與預(yù)期的形態(tài)相差甚遠(yuǎn),由此學(xué)生產(chǎn)生認(rèn)知沖突,從而激發(fā)探究欲望。研究表明,其原因可能是關(guān)鍵基因沒(méi)有表達(dá),也利于學(xué)生辯證地理解結(jié)構(gòu)與功能觀。

1.3雜種植株的鑒定①形態(tài)學(xué)鑒定:植株在葉片形狀和花的形態(tài)上與用于原生質(zhì)體融合的馬鈴薯和番茄品種明顯不同,花和葉具有雜種的特點(diǎn),但并沒(méi)有產(chǎn)生真正意義上的塊莖。②細(xì)胞學(xué)鑒定:科學(xué)家對(duì)一些愈傷組織再生出的芽進(jìn)行染色體計(jì)數(shù),結(jié)果如表1。③生物化學(xué)方法鑒定:1,5二磷酸核酮糖羧化酶(RuBPCase)由大小兩個(gè)亞基組成,小亞基由核基因編碼,大亞基由葉綠體DNA上基因編碼,科學(xué)家檢測(cè)了四株植物RuBPCase大小亞基的來(lái)源,結(jié)果如圖3。充分利用這三方面的鑒定資料,通過(guò)設(shè)置相關(guān)問(wèn)題,如依據(jù)表型進(jìn)行雜種植株的鑒定是否可靠?染色體數(shù)目接近48能否確定為雜種植株?RuBPCase檢測(cè)結(jié)果說(shuō)明什么?這些問(wèn)題的設(shè)計(jì),有利于培養(yǎng)學(xué)生的科學(xué)思維,同時(shí)也利于學(xué)生理解科學(xué)研究的思路和方法。

2學(xué)生實(shí)踐活動(dòng)

教學(xué)中增加培育“Pomato”的部分實(shí)驗(yàn)內(nèi)容,包括原生質(zhì)體的分離、純化和融合過(guò)程。在實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,學(xué)生能更好地理解去除細(xì)胞壁的方法、誘導(dǎo)融合的方法、篩選的必要性。增加課標(biāo)要求以外的學(xué)生實(shí)踐活動(dòng),是充分利用學(xué)校的現(xiàn)有條件,為學(xué)生提供可能的實(shí)踐機(jī)會(huì),將理論教學(xué)與實(shí)驗(yàn)教學(xué)相互融合,進(jìn)而利于學(xué)生深入理解植物體細(xì)胞雜交技術(shù)的原理和流程。但由于實(shí)驗(yàn)條件所限,未能實(shí)踐植物體細(xì)胞雜交的全部實(shí)驗(yàn)操作。

2.1實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備①實(shí)驗(yàn)材料:選取了多種實(shí)驗(yàn)材料,不僅選用番茄和馬鈴薯(包括番茄葉、番茄果實(shí)、馬鈴薯塊莖、馬鈴薯組培苗),還選用了其他實(shí)驗(yàn)材料(包括白菜葉、甘藍(lán)葉、西藍(lán)花花球、菜花花球以及鐵皮石斛愈傷組織),以期探究適宜分離原生質(zhì)體的實(shí)驗(yàn)材料。②試劑配制[4]:配制的溶液中,最主要的是酶解液,酶解液成分中纖維素酶、果膠酶、離析酶用于酶解細(xì)胞壁;甘露醇用于調(diào)節(jié)滲透壓,實(shí)驗(yàn)中需配制較高滲透壓的甘露醇溶液;MES可用于調(diào)節(jié)pH(緩沖劑),牛血清蛋白可減少或防止降解細(xì)胞壁過(guò)程中對(duì)細(xì)胞器的破壞;CaCl2具有保護(hù)細(xì)胞膜的作用。

2.2實(shí)驗(yàn)過(guò)程①分離并純化原生質(zhì)體具體操作過(guò)程如圖4[4]。學(xué)生疑惑1:為什么在切材料和酶解材料過(guò)程中都使用較高滲透壓的甘露醇?釋疑:在切材料時(shí)使用較高滲透壓的甘露醇,可使細(xì)胞出現(xiàn)微弱的質(zhì)壁分離,利于完整的原生質(zhì)體的釋放。酶解材料過(guò)程中使用較高滲透壓的甘露醇,可防止去除細(xì)胞壁后水分大量進(jìn)入原生質(zhì)體,導(dǎo)致原生質(zhì)體吸水脹破。疑惑2:去除細(xì)胞壁時(shí)不僅加入相關(guān)酶,還使用了較高滲透壓的甘露醇、CaCl2、牛血清蛋白、MES,還要控制酶解時(shí)間、酶解溫度、離心機(jī)轉(zhuǎn)速……其目的是什么?釋疑:確保原生質(zhì)體的結(jié)構(gòu)不被破壞,保持其形態(tài)和活力,只有確保結(jié)構(gòu)的完整,才能行使相應(yīng)功能。結(jié)果展示如圖5。②原生質(zhì)體融合具體操作過(guò)程如圖6[4]。結(jié)果展示如圖7。學(xué)生疑惑1:需要提供什么證據(jù)才能證明原生質(zhì)體正在融合?釋疑:最直接的證據(jù)就是看到原生質(zhì)體融合過(guò)程的連續(xù)動(dòng)態(tài)變化。在1小時(shí)內(nèi),將連續(xù)拍攝的15張馬鈴薯菜花原生質(zhì)體融合照片,制成動(dòng)態(tài)的視頻,證明馬鈴薯菜花兩個(gè)原生質(zhì)體正在融合(圖7D)。疑惑2:為什么要對(duì)融合的原生質(zhì)體進(jìn)行篩選A.番茄葉肉;B.番茄果肉;C.馬鈴薯葉肉;D.馬鈴薯塊莖E.白菜葉肉;F.甘藍(lán)葉肉;G.菜花花球;H.西藍(lán)花花球A.白菜甘藍(lán);B.西藍(lán)花菜花;C.馬鈴薯菜花;D.馬鈴薯菜花(融合動(dòng)態(tài)過(guò)程);E.菜花菜花;F.甘藍(lán)甘藍(lán);G.馬鈴薯馬鈴薯;H.馬鈴薯菜花(3個(gè)原生質(zhì)體)圖7顯微觀察不同實(shí)驗(yàn)材料的原生質(zhì)體融合釋疑:實(shí)驗(yàn)觀察到未融合的原生質(zhì)體、同種的兩個(gè)原生質(zhì)體融合、不同種的兩個(gè)原生質(zhì)體融合、不同種的三個(gè)原生質(zhì)體發(fā)生融合、同種或不同種的多個(gè)原生質(zhì)體融合現(xiàn)象,能夠說(shuō)明融合是不定向的,因此我們需要篩選出雜種細(xì)胞。疑惑3:PEG為什么能夠促進(jìn)原生質(zhì)體融合?釋疑:普遍認(rèn)為,PEG能夠改變細(xì)胞的膜結(jié)構(gòu),使兩個(gè)細(xì)胞接觸處質(zhì)膜的脂類分子發(fā)生疏散和重組,從而導(dǎo)致質(zhì)膜相互親和、融合。疑惑4:是否必須選用不同顏色的原生質(zhì)體進(jìn)行融合,否則就無(wú)法篩選?釋疑:利用物理特異性的差異篩選,如原生質(zhì)體大小、顏色、形態(tài)……也可用不同熒光素分別標(biāo)記親本原生質(zhì)體。利用細(xì)胞系互補(bǔ)篩選:只有互補(bǔ)的雜種細(xì)胞能夠生長(zhǎng)。利用生長(zhǎng)特異性差異篩選:利用細(xì)胞生長(zhǎng)和分化能力的差異。關(guān)注學(xué)生的實(shí)踐經(jīng)歷,在實(shí)踐中加深學(xué)生對(duì)于原理和過(guò)程的深入理解,體會(huì)結(jié)構(gòu)與功能相適應(yīng),只有確保結(jié)構(gòu)的完整,才能行使相應(yīng)功能。教師與學(xué)生針對(duì)技術(shù)難題,進(jìn)一步梳理歸納,形成完整的技術(shù)流程。

3總結(jié)

本節(jié)內(nèi)容側(cè)重生命觀念中“結(jié)構(gòu)與功能觀”的形成與應(yīng)用。學(xué)生基于已有認(rèn)知進(jìn)行方案的設(shè)計(jì)、分析方案的可行性、通過(guò)實(shí)驗(yàn)解決技術(shù)難題等活動(dòng)中,運(yùn)用“結(jié)構(gòu)與功能觀”解決和解釋概念形成過(guò)程中的相關(guān)問(wèn)題。本節(jié)課充分體現(xiàn)科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步對(duì)人類生產(chǎn)生活產(chǎn)生的影響,同時(shí)也體現(xiàn)了實(shí)驗(yàn)教學(xué)對(duì)概念形成的重要作用。(基金項(xiàng)目:北京市教育科學(xué)“十四五”規(guī)劃課題“基于學(xué)習(xí)單元模式下的生物實(shí)驗(yàn)教學(xué)實(shí)施策略研究”,No.CDDB21418)

作者:郭秋榮 王冉 王銀環(huán) 單位:北京市昌平區(qū)教師進(jìn)修學(xué)校 北京市昌平區(qū)第一中學(xué)