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淺談各科學在臨床醫學的作用:微生物學在臨床醫學的作用
在臨床實驗中，臨床醫師應在化驗單上寫上對病人的猜測性診斷，由此來使臨床實驗醫師進行合理的實驗方法和檢驗的程序，從而采集正確的臨床微生物標本；一旦臨床實驗室有了實驗結果和報告時，應及時報告微生物醫師，從而確立診斷方案。對于疑難罕見的微生物，臨床醫師應及時與臨床實驗室的實驗人員進行溝通，從而幫助對微生物標本的判斷和實驗。對臨床和微生物實驗室來說，微生物醫師對其二者的溝通起到了樞紐作用。舉例來說，在微生物實驗室進行實驗時，若圖涂片發生了問題，應由實驗室醫師及時與臨床溝通聯系，然后一起探討原因及結果。臨床微生物室可以每隔一段時間派出微生物醫師進行對臨床微生物感染的討論。對嚴重病人，微生物醫師要參與對其治療診斷的探討。臨床微生物室應與各臨床科室經常進行意見交流，一同解決有關微生物學的諸多問題。
一現代臨床微生物學中對病原學診斷的基本要求包括：
（1）提供的臨床標本；
（2）了解正常的菌群；
（3）結合臨床，進行實驗；
（4）病原學診斷需、合理；
（5）微生物實驗室應及時報告實驗的結婚；
（6）加強對檢驗項目的質量控制。
現代感染性疾病診斷最重要的一步為采集恰當的標本，從而要求臨床醫師能夠獲取代表感染性疾病的標本。細菌進行實驗的前提是了解知曉人體的正常菌群。在做微生物實驗時，應聯合臨床，做定性、定位和定量的實驗分析，患者的臨床診斷以及恰當的臨床實驗標本由臨床醫師提供，然后進行的討論分析，從而更加的為患者負責。微生物室應在涂片結果，敏感結果以及結果出來時及時與臨床醫師聯系，對病情做有力的報告。現代臨床微生物學應對各種檢驗項目加強質量控制，從而保障檢驗結果的性。現代臨床微生物學要求參與醫院感染疾病的監測、管理和控制。臨床微生物實驗室的作用有：加強對病原學診斷、微生物抗藥性以及環境、器械的監測；加強醫院的消毒與滅菌；對流行病進行試驗，并加以控制。
二臨床微生物實驗室對醫院感染的要求有：
（1）加強對醫院感染的監測；
（2）臨床微生物室參與醫院的教育工作；
（3）對消毒隔離加強管理；
（4）對抗菌性藥物進行試驗，快速試驗的報告。
若在臨床實驗中發現微生物的感染問題，應及時與臨床醫師聯系溝通，及時與控制感染的科室進行必要的聯系；一般提醒臨床對于病菌的來源，可在一定程度上預防病菌的傳播與擴散；臨床微生物實驗室要經常定期抽調人員去參與醫院進行的教育工作，從而更加的對微生物菌體做出更的判斷；正確消毒對微生物菌體的預防和控制非常重要。臨床微生物實驗室的工作包括正確的對消毒隔離工作進行指導和監察，并且在特殊情況下，參與對特殊耐藥細菌的實驗工作并制定消毒隔離的措施。臨床微生物室應定期對微生物耐藥性的監測結果，這將對臨床的救治成功率大有幫助。現代臨床微生物學在現代醫學中對實際臨床中的感染控制工作發揮著舉足輕重的作用。臨床微生物學要求緊密結合與臨床之間的關系，并且還要牢牢掌握最基本的知識，對常規的微生物檢驗工作要快速進行，判斷要，并且應即有速度又有質量對實驗結果做出報告。
臨床微生物學要求實驗結果與臨床盡可能的相符。臨床微生物實驗室要加強對教育培訓的宣傳，并能對在微生物實驗室中實驗的結果做出合理的解釋。現代臨床微生物學不僅對于高等院校的學生們，或是對醫學工作者的知識更新都是極其有必要的。醫院應切實加強醫院內感染控制的工作，從而為服務臨床做到更好的服務。利用臨床微生物學的基礎知識以及微生物學的理論與技能來進行臨床微生物學的檢驗。臨床微生物學需通過檢驗系統，從中了解各類微生物的特性，快速、有效的做出對病原學的診斷及微生物檢驗報告，為治療、診斷措施提供強有力的科學理論依據。為醫學感染控制提供病原學診斷是臨床微生物學檢驗的目的，從而達到減少、避免和控制病原體的效果。微生物實驗室工作者應加強對微生物標本的提取工作，然后寫出對其的研究報告，為醫學臨床提供幫助。現代臨床微生物學的任務包括：獲取標本信息，并且學會妥善保存與保護，提高對微生物的檢驗率。利用微生物學知識學會多種對微生物檢測的方法，從中選出的檢測方式，還包括系統鑒定程序，以及對檢測中存在的質量控制。
現科學已研究出多種用來研究微生物的機器，對微生物實驗室工作者的研究工作提供幫助，奧尼爾對檢測的快速、有效性提供了前提的條件。現代臨床微生物檢驗要求三定一結合，即結合臨床信息，定量、定位和定性分析微生物，了解機體正常存在的菌種，從而確保微生物標本的有效性與性。目前，現代臨床微生物學的檢驗正朝向器械化、自動化以及分子微生物的方面發展。現代臨床微生物學在現代醫學感染控制中的作用變得越來越重要，微生物感染可能來源于互相交流間的交叉感染，也可能來源于內源性感染。對微生物感染的控制將是現代醫學面臨的一大難題，并且一步步得到突破發展。
作者：王丹單位：河北醫科大學臨床學院
淺談各科學在臨床醫學的作用:電泳技術在臨床醫學的作用
1CE在臨床檢驗醫學的應用
1.1血清蛋白質分析
血清蛋白電泳通常是臨床上在無論何種原因引起的血液沉降率增加時都需要進行的常規實驗檢測項目，它將有助于確診臨床報告的炎癥或感染的狀況及提示進一步檢測其他項目。采用CE可分離血清蛋白，并能計算各蛋白質的相對濃度，避免了凝膠電泳法染色、脫色過程中多種影響因素造成的誤差，CE法的結果重復性好，可信度高［11］。前清蛋白在血清中的濃度可表明營養狀態，且是確定惡性腫瘤、炎癥、肝硬化、霍奇金病的重要指標，多數電泳法難以分辨，而用CE法很容易分離定量，檢測波長為214或200nm。CE不僅增加了清蛋白部分的分辯率，對雙清蛋白血癥檢測的靈敏度也有了很大的提高。CE提供了足夠的在α1區的分辯率以區分α1酸性糖蛋白與α1抗胰蛋白酶。在α2區的球蛋白區，α2巨球蛋白與觸球蛋白不易區分，但在β-球蛋白區具有高分辯率［12］。CE法對腎病、慢性感染、自身免疫病和肝硬化等多種疾病的免疫球蛋白分析有較好的優勢。
1.2單克隆免疫球蛋白的特征鑒別
單克隆免疫球蛋白是一種過度合成的單一類型或亞型的異常免疫球蛋白。它的產生是由于單一克隆的惡性或高致敏B細胞的無限增殖，從而產生同源性的單克隆免疫球蛋白。單克隆免疫球蛋白組分的檢測運用了各種與免疫學、血液學和生物化學等領域相關的技術和儀器。通過用特異性抗體包被的瓊脂糖凝膠球消除一個特殊的峰來指示是哪種單克隆成分，借此對免疫球蛋白的型、亞型和輕鏈型予以鑒定和分類［13］。這一技術提高了對該蛋白組分的分析與研究水平。
1.3血紅蛋白成分的分析
在地貧高發區檢測出地貧高風險夫婦和預防地貧患兒出生是關系到提高我國出生人口素質和實現優生優育工作的一個重要任務。其中血紅蛋白(Hb)電泳是研究和分離異常血紅蛋白的有效方法，亦是診斷血紅蛋白分子病和地貧不可缺少的手段之一［15］。毛細管電泳法是在充滿電泳液的石英毛細管中進行電泳的技術，在溶血試劑中進行稀釋的紅細胞樣品，會被注射到毛細管的負極端，在高壓電的作用下競相電泳分離，然后Hb會被靠近正極端的415nm光波檢測裝置檢測到［16］。通過毛細管電泳將蛋白質分離，采用波長為200nm氘光源和CCD探測器，對血紅蛋白成分分析靈敏度和分辨率高［17］。CE是一種敏感度和度較高的分析方法，具有操作簡便、檢測時間短的優點［18］。通過使用堿性pH緩沖液，正常和異常(或變異體)血紅蛋白按下列順序檢測出來，從陰極到陽極依次為:δA''''2(A2變異體)，C，A2/O-阿拉伯血紅蛋白(O-Arab)，E，S，D，G費城血紅蛋白(G-Philadelphia)，F，A，Hope，Bart，J，N-巴爾的摩血紅蛋白(N-Baltimore)和H。在CE區帶中不出現碳酸酐酶，不但可以鑒別出HbA2變異體，還能夠檢測HbA、HbF、HbA2含量以及其他異常血紅蛋白，可用于診斷地中海貧血及其他血紅蛋白病［19］。
1.4尿蛋白質分析
臨床醫生和生物學家關注的尿蛋白檢查的概念正在逐步更新。蛋白尿的分析得益于近年來重要的方法學的進步，特別是根據分子量和所帶電荷來分離蛋白質的電泳技術。當今的生物學技術主要應用電泳方法來檢測游離輕鏈，并用免疫學技術來分析它們的特性。免疫游離輕鏈是腎臟損害的直接原因，最常見的是腎小管性或系統性。這一毒性的出現可以是在尿中顯現沉淀，也可以在間質中沉積。在過去的幾年里，有關免疫球蛋白輕鏈毒性因素方面的認識已有了很大的進展。電泳異常條帶位于β或γ區的病例中有三分之二的情況存在本周氏蛋白。一條或多個條帶是根據尿液中單克隆免疫球蛋白存在與否進行識別，并且與典型的腎損傷或腎功能不全相關［20］。游離輕鏈常常沉積在腎小管中，導致腎小管中毒。由于蛋白尿定量與腎臟損害相關，形成蛋白尿的特定蛋白性質就反映了腎單位病變所在的位置和腎功能異常的發病機理。尿中特定蛋白的分析可以認為是如同一個真正的生化活檢，它可即刻提供腎單位內部的狀況［21］。
1.5肌紅蛋白分析
肌紅蛋白異常增高常在急性心梗后患者的血液和尿液中出現，而免疫比濁法難以測定低濃度的肌紅蛋白。但是，CE可在8min內快速分離尿中低濃度肌紅蛋白并與血紅蛋白相鑒別。
1.6脂蛋白分析
CE可將血漿脂蛋白分離出14個亞組分，如在分離緩沖液中加入表面活性劑，可在短時間內對2個主要組分:高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)進行定量，對LDL進一步分離為3個亞組分:LDL、中密度脂蛋白(IDL)和極低密度脂蛋白(VLDL)，并對各組分的比例進行推算，從而對脂蛋白異常提供不同脂肪代謝的信息。
1.7糖化血紅蛋白(HbA1c)分析
血紅細胞中的血紅蛋白糖基化部分即為糖化血紅蛋白(HbA1c)。HbA1c的水平與測定前數周內的血糖水平呈正線性相關，因此對糖尿病患者測定糖化血紅蛋白可了解過去一段較長時間內的血糖水平。此測定并不能作為糖尿病的診斷，但可用于作為控制血糖的指標，糖化血紅蛋白的量還可作為評價各種治療措施效果的標準。應用CE進行HbA1c電泳能分離幾種糖蛋白的糖基構型，可鑒別糖化血紅蛋白A1、A1c和其他異構體，對糖尿病的監控具有重要意義。
1.8同工酶的分離
應用CE技術對多種同工酶進行了成功的分離。其方法是先使用CE法分離樣品形成同工酶區帶后，切斷電源，并加入含底物的緩沖液，酶催化底物顯色，進一步形成可被檢測區帶，又接通電源，再次電泳，使被檢測的同工酶染色區帶先后通過檢測器，測定較大吸收峰值即測定和分析被分離的同工酶。如檢測淀粉酶P(胰)和S(唾液)型等，均可采用HPCE技術分離其同工酶。
1.9免疫復合物分析
CE可將免疫復合物從結合的抗原抗體中迅速分離出來，應用熒光標記單克隆抗體，經LIF-CE檢測，檢測限可達毫克級，可用于混合液體中低濃度的免疫復合物鑒定。
1.10DN段和染色體分析
CE分離DNA分子需多聚物交聯劑如聚丙烯酰胺、聚乙二醇、甲基纖維素等材料添加到緩沖液中作為分子篩，可對相差一個甚至幾個堿基DNA高效分離。有作者［22］應用CE做X連鎖隱性遺傳病研究，成功地對DNA限制片段進行了基因多態性分析。研究表明CE可用于分析拾攜帶者及胎兒產前診斷。
1.11在治療藥物監測中的應用
CE可簡便快速分析生物樣品中各種有形的藥物成分。在藥理學研究、法醫學檢查及臨床毒理等方面也有廣泛應用［23］。在糖尿病的治療監測中，可檢測血中格列本脲的濃度以防止藥物使用不當導致低血糖。
1.12其他小分子/離子的檢測
CE能在3～4min分離血和尿樣品中的血管造影劑含量、草酸鹽等弱陰離子，檢測尿樣中十幾種卟啉物質和維生素C異構體。在新生兒遺傳性有機酸尿癥篩查用CE可檢測到時多種有機酸標志物。
2展望
隨著CE技術在臨床檢驗醫學方面的廣泛應用，也必將帶來更多的挑戰，未來的CE技術在細胞和組織等復雜生物樣品體系中的臨床檢驗分析將成為主要的的發展趨勢。生物樣品分析必然要求進一步發展復雜樣品前處理富集技術和更靈敏的檢測技術。電泳方法的創新性研究主要體現在新分離模式的建立和電泳技術的聯用上，例如微乳液毛細管電動色譜(MEEKC)、親和毛細管電泳(ACE)和芯片毛細管電泳等;還有將分子信標技術與CE技術相結合進行可變長度寡聚核苷酸識別和基因檢測［24］;探索利用CE對PCR產物作DNA單鏈構象多態性分析篩查點突變等。近年來我國在電泳技術的臨床應用上有了迅猛發展，尤其是陣列毛細管電泳儀已經問世，這將克服目前大多數商品化毛細管電泳儀只能進行單根毛細管電泳的缺陷，這種高通量的新方法將會給后基因組時代的基因分析帶來革命性的變化。CE技術作為一種重要的分析手段，隨著它的快速發展，必將在臨床檢驗醫學方面有著更廣泛的應用前景并在各種分析分離領域發揮巨大的發展潛力。
作者：阮麗明周艷潔朱茂靈單位：廣西南寧市人口和計劃生育服務中心
淺談各科學在臨床醫學的作用:臨床醫學的病理學教學作用
1臨床病例討論教學形式有助于培養學生臨床思維能力
臨床病理討論就是臨床和病理共同對臨床死亡病例的尸檢結果與生前診斷及治療過程進行對比分析，以汲取經驗教訓，既是診斷病理學的延伸，也是臨床醫生與病理醫生密切聯系，加強協作的有效途徑。在病理教學中引入臨床病理討論是提高教學質量和醫學整體教育質量的一個好方法。臨床病例討論可在實驗室以小班為單位分組開展，精選2-3個典型病例,引導同學應用現有的知識從病因、發病機制、臨床表現等方面展開討論,并回答相關問題，其他組同學提出疑問或補充,老師解答疑難并歸納總結。臨床病理討論增強基礎理論與臨床實踐相結合，不僅是對授課內容的回顧,更重要的是教會學生病例分析的基本思路和方法,使學生能夠對自己所學的知識進行縱向和橫向聯系,理解各病理過程之間的相互聯系,做到把整本教材的內容融會貫通起來,逐漸形成正確的臨床思維過程。這種學生和教師之間的互動式教學形式,激發了學生的學習興趣和學習積極性,促使他們認真讀書、獨立思考、查閱資料、相互討論，有助于培養學生的臨床思維能力。
2體驗尸體解剖和臨床外檢工作有助于學生更好掌握病理知識
病理學很重視疾病的形態學變化，而很多疾病的病理變化的獲得來自細致的觀察和實踐。學生看到的病理教學標本都是經過福爾馬林固定，其大小、顏色、硬度與新鮮標本有所不同，教學切片也是經過多道程序事先制好的，病變區域的形狀、大小可因切面而不同。為使學生能正確且熟練地辨認病變的標本、病理切片,應盡可能的讓學生有機會接觸臨床病理工作。一般醫學院校都有相應的附屬醫院，病理學老師都是身兼教學和臨床外檢工作，因此有條件讓學生參與尸體解剖工作和臨床外檢工作，讓學生親生體驗一下新鮮的人體病理標本是怎樣的，和實驗室看到的經固定液固定的標本有什么區別，還可以了解病理切片是怎樣來的，從而對課堂上所學的內容有更深刻的體會，使學生以后在實驗中觀察病變標本時能較快、正確地描述病理變化，同時了解病理的工作和流程，日后從事臨床工作后更便于溝通。
3注重教師的素質培養是充分發揮教學橋梁作用的保障
要充分發揮病理學的橋梁作用，首先要求教師應具備除病理學知識之外的各種基礎和臨床知識，包括組織胚胎學、人體解剖學、病理生理學、內科學、外科學等,并能融匯貫通靈活應用于教學，努力做一個“全能型”教師，這是充分發揮教學橋梁作用的保障。教師只有通過不斷拓寬自身的知識面,不斷的學習,提高自身的綜合素質,力求做到“精通病理學,通曉全科醫學”，才能為訓練學生由基礎醫學向臨床醫學學習轉化創造充分的必要的條件。病理學是醫學的主干課程之一,是連接基礎醫學與臨床醫學的一門基礎課程。通過學習,除了要教會學生疾病的病理改變，更要聯系臨床知識，打破了基礎與臨床的界限和學科的界限，讓學生更深刻掌握課堂知識，培養學生臨床思維能力,為后續學習臨床專業課、參加臨床實踐和進行疾病的防治奠定基礎，從而能更充分發揮病理課的橋梁作用，為學生完成向臨床醫師的角色轉化做好充分準備。
作者：周新華 趙彤 申洪 丁彥青 單位：南方醫科大學基礎醫學院病理學系
臨床醫學的病理學教學作用
1臨床病例討論教學形式有助于培養學生臨床思維能力
臨床病理討論就是臨床和病理共同對臨床死亡病例的尸檢結果與生前診斷及治療過程進行對比分析,以汲取經驗教訓,既是診斷病理學的延伸,也是臨床醫生與病理醫生密切聯系,加強協作的有效途徑。在病理教學中引入臨床病理討論是提高教學質量和醫學整體教育質量的一個好方法。臨床病例討論可在實驗室以小班為單位分組開展,精選2-3個典型病例,引導同學應用現有的知識從病因、發病機制、臨床表現等方面展開討論,并回答相關問題,其他組同學提出疑問或補充,老師解答疑難并歸納總結。臨床病理討論增強基礎理論與臨床實踐相結合,不僅是對授課內容的回顧,更重要的是教會學生病例分析的基本思路和方法,使學生能夠對自己所學的知識進行縱向和橫向聯系,理解各病理過程之間的相互聯系,做到把整本教材的內容融會貫通起來,逐漸形成正確的臨床思維過程。這種學生和教師之間的互動式教學形式,激發了學生的學習興趣和學習積極性,促使他們認真讀書、獨立思考、查閱資料、相互討論,有助于培養學生的臨床思維能力。
2體驗尸體解剖和臨床外檢工作有助于學生更好掌握病理知識
病理學很重視疾病的形態學變化,而很多疾病的病理變化的獲得來自細致的觀察和實踐。學生看到的病理教學標本都是經過福爾馬林固定,其大小、顏色、硬度與新鮮標本有所不同,教學切片也是經過多道程序事先制好的,病變區域的形狀、大小可因切面而不同。為使學生能正確且熟練地辨認病變的標本、病理切片,應盡可能的讓學生有機會接觸臨床病理工作。一般醫學院校都有相應的附屬醫院,病理學老師都是身兼教學和臨床外檢工作,因此有條件讓學生參與尸體解剖工作和臨床外檢工作,讓學生親生體驗一下新鮮的人體病理標本是怎樣的,和實驗室看到的經固定液固定的標本有什么區別,還可以了解病理切片是怎樣來的,從而對課堂上所學的內容有更深刻的體會,使學生以后在實驗中觀察病變標本時能較快、正確地描述病理變化,同時了解病理的工作和流程,日后從事臨床工作后更便于溝通。
3注重教師的素質培養是充分發揮教學橋梁作用的保障
要充分發揮病理學的橋梁作用,首先要求教師應具備除病理學知識之外的各種基礎和臨床知識,包括組織胚胎學、人體解剖學、病理生理學、內科學、外科學等,并能融匯貫通靈活應用于教學,努力做一個“全能型”教師,這是充分發揮教學橋梁作用的保障。教師只有通過不斷拓寬自身的知識面,不斷的學習,提高自身的綜合素質,力求做到“精通病理學,通曉全科醫學”,才能為訓練學生由基礎醫學向臨床醫學學習轉化創造充分的必要的條件。病理學是醫學的主干課程之一,是連接基礎醫學與臨床醫學的一門基礎課程。通過學習,除了要教會學生疾病的病理改變,更要聯系臨床知識,打破了基礎與臨床的界限和學科的界限,讓學生更深刻掌握課堂知識,培養學生臨床思維能力,為后續學習臨床專業課、參加臨床實踐和進行疾病的防治奠定基礎,從而能更充分發揮病理課的橋梁作用,為學生完成向臨床醫師的角色轉化做好充分準備。
淺談各科學在臨床醫學的作用:論電泳技術在臨床醫學的作用
1CE在臨床檢驗醫學的應用
1.1血清蛋白質分析
血清蛋白電泳通常是臨床上在無論何種原因引起的血液沉降率增加時都需要進行的常規實驗檢測項目,它將有助于確診臨床報告的炎癥或感染的狀況及提示進一步檢測其他項目。采用CE可分離血清蛋白,并能計算各蛋白質的相對濃度,避免了凝膠電泳法染色、脫色過程中多種影響因素造成的誤差,CE法的結果重復性好,可信度高[11]。前清蛋白在血清中的濃度可表明營養狀態,且是確定惡性腫瘤、炎癥、肝硬化、霍奇金病的重要指標,多數電泳法難以分辨,而用CE法很容易分離定量,檢測波長為214或200nm。CE不僅增加了清蛋白部分的分辯率,對雙清蛋白血癥檢測的靈敏度也有了很大的提高。CE提供了足夠的在α1區的分辯率以區分α1酸性糖蛋白與α1抗胰蛋白酶。在α2區的球蛋白區,α2巨球蛋白與觸球蛋白不易區分,但在β-球蛋白區具有高分辯率[12]。CE法對腎病、慢性感染、自身免疫病和肝硬化等多種疾病的免疫球蛋白分析有較好的優勢。
1.2單克隆免疫球蛋白的特征鑒別
單克隆免疫球蛋白是一種過度合成的單一類型或亞型的異常免疫球蛋白。它的產生是由于單一克隆的惡性或高致敏B細胞的無限增殖,從而產生同源性的單克隆免疫球蛋白。單克隆免疫球蛋白組分的檢測運用了各種與免疫學、血液學和生物化學等領域相關的技術和儀器。通過用特異性抗體包被的瓊脂糖凝膠球消除一個特殊的峰來指示是哪種單克隆成分,借此對免疫球蛋白的型、亞型和輕鏈型予以鑒定和分類[13]。這一技術提高了對該蛋白組分的分析與研究水平。
1.3血紅蛋白成分的分析
在地貧高發區檢測出地貧高風險夫婦和預防地貧患兒出生是關系到提高我國出生人口素質和實現優生優育工作的一個重要任務。其中血紅蛋白(Hb)電泳是研究和分離異常血紅蛋白的有效方法,亦是診斷血紅蛋白分子病和地貧不可缺少的手段之一[15]。毛細管電泳法是在充滿電泳液的石英毛細管中進行電泳的技術,在溶血試劑中進行稀釋的紅細胞樣品,會被注射到毛細管的負極端,在高壓電的作用下競相電泳分離,然后Hb會被靠近正極端的415nm光波檢測裝置檢測到[16]。通過毛細管電泳將蛋白質分離,采用波長為200nm氘光源和CCD探測器,對血紅蛋白成分分析靈敏度和分辨率高[17]。CE是一種敏感度和度較高的分析方法,具有操作簡便、檢測時間短的優點[18]。通過使用堿性pH緩沖液,正常和異常(或變異體)血紅蛋白按下列順序檢測出來,從陰極到陽極依次為:δA'2(A2變異體),C,A2/O-阿拉伯血紅蛋白(O-Arab),E,S,D,G費城血紅蛋白(G-Philadelphia),F,A,Hope,Bart,J,N-巴爾的摩血紅蛋白(N-Baltimore)和H。在CE區帶中不出現碳酸酐酶,不但可以鑒別出HbA2變異體,還能夠檢測HbA、HbF、HbA2含量以及其他異常血紅蛋白,可用于診斷地中海貧血及其他血紅蛋白病[19]。
1.4尿蛋白質分析
臨床醫生和生物學家關注的尿蛋白檢查的概念正在逐步更新。蛋白尿的分析得益于近年來重要的方法學的進步,特別是根據分子量和所帶電荷來分離蛋白質的電泳技術。當今的生物學技術主要應用電泳方法來檢測游離輕鏈,并用免疫學技術來分析它們的特性。免疫游離輕鏈是腎臟損害的直接原因,最常見的是腎小管性或系統性。這一毒性的出現可以是在尿中顯現沉淀,也可以在間質中沉積。在過去的幾年里,有關免疫球蛋白輕鏈毒性因素方面的認識已有了很大的進展。電泳異常條帶位于β或γ區的病例中有三分之二的情況存在本周氏蛋白。一條或多個條帶是根據尿液中單克隆免疫球蛋白存在與否進行識別,并且與典型的腎損傷或腎功能不全相關[20]。游離輕鏈常常沉積在腎小管中,導致腎小管中毒。由于蛋白尿定量與腎臟損害相關,形成蛋白尿的特定蛋白性質就反映了腎單位病變所在的位置和腎功能異常的發病機理。尿中特定蛋白的分析可以認為是如同一個真正的生化活檢,它可即刻提供腎單位內部的狀況[21]。
1.5肌紅蛋白分析
肌紅蛋白異常增高常在急性心梗后患者的血液和尿液中出現,而免疫比濁法難以測定低濃度的肌紅蛋白。但是,CE可在8min內快速分離尿中低濃度肌紅蛋白并與血紅蛋白相鑒別。
1.6脂蛋白分析
CE可將血漿脂蛋白分離出14個亞組分,如在分離緩沖液中加入表面活性劑,可在短時間內對2個主要組分:高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)進行定量,對LDL進一步分離為3個亞組分:LDL、中密度脂蛋白(IDL)和極低密度脂蛋白(VLDL),并對各組分的比例進行推算,從而對脂蛋白異常提供不同脂肪代謝的信息。
1.7糖化血紅蛋白(HbA1c)分析
血紅細胞中的血紅蛋白糖基化部分即為糖化血紅蛋白(HbA1c)。HbA1c的水平與測定前數周內的血糖水平呈正線性相關,因此對糖尿病患者測定糖化血紅蛋白可了解過去一段較長時間內的血糖水平。此測定并不能作為糖尿病的診斷,但可用于作為控制血糖的指標,糖化血紅蛋白的量還可作為評價各種治療措施效果的標準。應用CE進行HbA1c電泳能分離幾種糖蛋白的糖基構型,可鑒別糖化血紅蛋白A1、A1c和其他異構體,對糖尿病的監控具有重要意義。
1.8同工酶的分離
應用CE技術對多種同工酶進行了成功的分離。其方法是先使用CE法分離樣品形成同工酶區帶后,切斷電源,并加入含底物的緩沖液,酶催化底物顯色,進一步形成可被檢測區帶,又接通電源,再次電泳,使被檢測的同工酶染色區帶先后通過檢測器,測定較大吸收峰值即測定和分析被分離的同工酶。如檢測淀粉酶P(胰)和S(唾液)型等,均可采用HPCE技術分離其同工酶。
1.9免疫復合物分析
CE可將免疫復合物從結合的抗原抗體中迅速分離出來,應用熒光標記單克隆抗體,經LIF-CE檢測,檢測限可達毫克級,可用于混合液體中低濃度的免疫復合物鑒定。
1.10DN段和染色體分析
CE分離DNA分子需多聚物交聯劑如聚丙烯酰胺、聚乙二醇、甲基纖維素等材料添加到緩沖液中作為分子篩,可對相差一個甚至幾個堿基DNA高效分離。有作者[22]應用CE做X連鎖隱性遺傳病研究,成功地對DNA限制片段進行了基因多態性分析。研究表明CE可用于分析拾攜帶者及胎兒產前診斷。
1.11在治療藥物監測中的應用
CE可簡便快速分析生物樣品中各種有形的藥物成分。在藥理學研究、法醫學檢查及臨床毒理等方面也有廣泛應用[23]。在糖尿病的治療監測中,可檢測血中格列本脲的濃度以防止藥物使用不當導致低血糖。
1.12其他小分子/離子的檢測
CE能在3~4min分離血和尿樣品中的血管造影劑含量、草酸鹽等弱陰離子,檢測尿樣中十幾種卟啉物質和維生素C異構體。在新生兒遺傳性有機酸尿癥篩查用CE可檢測到時多種有機酸標志物。
2展望
隨著CE技術在臨床檢驗醫學方面的廣泛應用,也必將帶來更多的挑戰,未來的CE技術在細胞和組織等復雜生物樣品體系中的臨床檢驗分析將成為主要的的發展趨勢。生物樣品分析必然要求進一步發展復雜樣品前處理富集技術和更靈敏的檢測技術。電泳方法的創新性研究主要體現在 新分離模式的建立和電泳技術的聯用上,例如微乳液毛細管電動色譜(MEEKC)、親和毛細管電泳(ACE)和芯片毛細管電泳等;還有將分子信標技術與CE技術相結合進行可變長度寡聚核苷酸識別和基因檢測[24];探索利用CE對PCR產物作DNA單鏈構象多態性分析篩查點突變等。近年來我國在電泳技術的臨床應用上有了迅猛發展,尤其是陣列毛細管電泳儀已經問世,這將克服目前大多數商品化毛細管電泳儀只能進行單根毛細管電泳的缺陷,這種高通量的新方法將會給后基因組時代的基因分析帶來革命性的變化。CE技術作為一種重要的分析手段,隨著它的快速發展,必將在臨床檢驗醫學方面有著更廣泛的應用前景并在各種分析分離領域發揮巨大的發展潛力。
