本書(shū)介紹了酶學(xué)中的實(shí)驗(yàn)方法。內(nèi)容涉及酶反應(yīng)、酶測(cè)定的基本理論、酶的實(shí)驗(yàn)室操作、酶的技術(shù)應(yīng)用和測(cè)定儀器等實(shí)用性很強(qiáng)的內(nèi)
容,是一本可操作性很強(qiáng)的實(shí)驗(yàn)室酶學(xué)手冊(cè)。在內(nèi)容編排上體現(xiàn)了下列特色:
列出了大約60種不同的酶的具體測(cè)定方法:
詳細(xì)介紹了蛋白質(zhì)結(jié)合和固定化酶的測(cè)定方法。
作者Hans Bisswanger教授一直從事于酶學(xué)領(lǐng)域的研究而且有著幾十年的教學(xué)經(jīng)驗(yàn),他在總結(jié)教學(xué)實(shí)踐和科學(xué)研究的基礎(chǔ)上寫(xiě)成本書(shū)。本書(shū)可供生物化學(xué)、分子生物學(xué)、發(fā)育生物學(xué)、生物工程等領(lǐng)域的研究生和高年級(jí)本科生閱讀,也可供上述領(lǐng)域研究人員參考。
更多生物好書(shū)
1 引言
2 酶命名
3 酶反應(yīng)
3.1 酶反應(yīng)理論
3.1.1 反應(yīng)級(jí)數(shù)
3.2 米氏方程
3.3 酶測(cè)定理論
3.3.1 反應(yīng)曲線分析
3.3.2 如何進(jìn)行酶測(cè)定
3.3.3 酶活力
3.4 偶聯(lián)酶反應(yīng)理論
3.4.1 雙偶聯(lián)酶反應(yīng)
3.4.2 三偶聯(lián)酶反應(yīng)
3.5 底物測(cè)定
3.5.1 終點(diǎn)法
3.5.2 偶聯(lián)酶反應(yīng)
3.5.3 動(dòng)力學(xué)方法測(cè)定底物
3.5.4 酶的循環(huán)
3.6 儀器方面
3.6.1 分光光度法
3.6.2 電化學(xué)方法
3.6.3 釋放或消耗氣體的反應(yīng)的分析
3.7 酶的測(cè)定
3.7.1 總論
3.7.2 應(yīng)用方面
3.7.3 緩沖液和溶液
3.7.4 氧化還原酶測(cè)定
3.7.5 丙酮酸脫氫酶復(fù)合體(PDHC)
3.7.6 α-酮戊二酸脫氫酶復(fù)合體(OGDHC)
3.7.7 轉(zhuǎn)移酶
3.7.8 水解酶
3.7.9 蛋白酶
3.7.10 裂解酶
3.7.11 異構(gòu)酶
3.7.12 由酶循環(huán)確定煙酰胺核苷酸
3.8 多種方法
3.8.1 蛋白質(zhì)測(cè)定
3.8.2 磷酸測(cè)定
3.8.3 酶溶液濃縮
3.9 酶免疫測(cè)定
3.9.1 非競(jìng)爭(zhēng)固相酶免疫測(cè)定
3.9.2 競(jìng)爭(zhēng)固相酶免疫測(cè)定
3.9.3 酶免疫測(cè)定方法
4 結(jié)合測(cè)定
4.1 不可逆結(jié)合、可逆結(jié)合、特異性結(jié)合和非特異性結(jié)合
4.1.1 總論
4.1.2 實(shí)驗(yàn)
4.2 根據(jù)大小不同進(jìn)行結(jié)合測(cè)定
4.2.1 超濾
4.2.2 平衡透析
4.2.3 結(jié)合測(cè)定的計(jì)算
4.2.4 凝膠過(guò)濾
4.2.5 超離心
4.3 分光光度技術(shù)
4.3.1 示差分光光度法
4.3.2 熒光分光光度法
4.4 結(jié)合測(cè)定的其他方法
4.4.1 放射性標(biāo)記
4.4.2 反射計(jì)干涉分光光度法
5 酶的技術(shù)應(yīng)用
5.1 酶固定化原理
5.1.1 吸附
5.1.2 包埋
5.1.3 微囊法
5.1.4 交聯(lián)
5.1.5 共價(jià)結(jié)合到固體支持物
5.2 酶固定化方法
5.2.1 微膠囊化尼龍珠
5.2.2 丙烯酰胺包埋
5.2.3 酶在非孔玻璃表面的共價(jià)固定化
5.2.4 可調(diào)孔玻璃的固定化
5.2.5 共價(jià)固定化酶到聚酰胺
5.2.6 用三乙基氧四氟硼酸的烷基化
5.2.7 聚酰胺部分水解后固定化酶到氨基
5.2.8 聚酰胺部分水解后固定化酶到羧基
5.2.9 固定化酶到聚酯
5.2.10 用堿水解和氯甲苯活化的固定化
5.2.11 堿水解和由二吲哚碳酰的活化
5.3 固定化酶的分析
5.3.1 蛋白質(zhì)測(cè)定
5.3.2 酶測(cè)定
5.4 酶反應(yīng)器
5.4.1 批式反應(yīng)器(攪拌罐式反應(yīng)器)
5.4.2 膜式反應(yīng)器
5.4.3 固體床式反應(yīng)器
5.4.4 固定化細(xì)胞
5.5 生物傳感器
5.5.1 酶電極
5.5.2 免疫電極
5.5.3 其他生物傳感器
5.5.4 生物親和傳感器
5.6 固定化酶與治療
附錄 酶的EC號(hào)列表
索引
3 酶反應(yīng)
3.3 酶測(cè)定理論
3.3.1 反應(yīng)曲線分析
測(cè)定酶反應(yīng)實(shí)驗(yàn)的一個(gè)首要難點(diǎn)是:酶反應(yīng)并不是像火車(chē)一樣總是以一個(gè)恒定的速度前進(jìn),它不是遵循簡(jiǎn)單的定時(shí)過(guò)程,而是不同的階段彼此融合。由于酶的特殊性、選擇的條件以及其他因素,如不同階段或多或少的融合,因此,除非有一個(gè)關(guān)于酶反應(yīng)比較清楚的基本原則,否則對(duì)酶反應(yīng)的分析將會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的判斷。
幸運(yùn)的是,數(shù)不清的酶反應(yīng)可以用一個(gè)單一的、相對(duì)簡(jiǎn)單的關(guān)系來(lái)描述,就是上面提到的米氏方程。然而米氏方程也有它的局限性,及時(shí)個(gè)局限性就是,這個(gè)方程起源于不可逆的單一底物的反應(yīng)情況,但大多數(shù)的酶反應(yīng)都被認(rèn)為是可逆的,有兩個(gè)或更多的底物,同時(shí)也包括輔助因子或輔酶。考慮所有這些因素,酶反應(yīng)的關(guān)系變得復(fù)雜。然而,如此難的關(guān)系也可以通過(guò)簡(jiǎn)化歸納為米氏方程的單一形式,比如說(shuō)僅限于初速度或只考慮除了可變的底物外所有組分都作為常數(shù)。然而,這種簡(jiǎn)化并不總能保障在實(shí)驗(yàn)條件下真正地應(yīng)用。
一般來(lái)說(shuō),酶實(shí)驗(yàn)有兩個(gè)目的:測(cè)定酶活力或者計(jì)算底物濃度。盡管為了達(dá)到這兩個(gè)目的需要不同策略,但兩者的實(shí)質(zhì)都是了解酶反應(yīng)過(guò)程。因此,首先對(duì)一個(gè)普通的酶反應(yīng)進(jìn)行討論。
……